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            利用RRLC改善西洋參HPLC的分離速度和靈敏度

            作者: 時間:2013-05-07 來源:網(wǎng)絡(luò) 收藏
            色譜條件

            系統(tǒng):Agilent 1200快速高分離度液相色譜(),包括:在線脫氣機(jī)(G1379B),SL型二元泵(G1312B),SL型自動進(jìn)樣器(G1367C),SL型柱恒溫箱(G1316B)和SL型二極管陣列檢測器(G1315C)。

            檢測池:2μl
            峰寬:0.01min(0.2s)
            狹縫:4nm
            進(jìn)樣器后管線內(nèi)徑:0.12mm(Seat Capillary為0.17mm)
            色譜柱:ZORBAX SB C18 RRHT色譜柱,4.6×50mm,1.8
            流動相:A為0.1%的H3PO4,B為乙腈,梯度分離
            柱溫:25℃
            流速:2ml/min
            檢測波長:203nm
            進(jìn)樣量:5μl

            分離的梯度重現(xiàn)性

            使用RRLC系統(tǒng)進(jìn)行快速分離不僅可以獲得速度、分離度與的改善,同時可以保持液相色譜分離技術(shù)的杰出重現(xiàn)性(見圖4)。

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            圖4 西洋參分析中RRLC梯度分離的重現(xiàn)性,色譜條件同圖3RRLC和的轉(zhuǎn)換

            RRLC的良好兼容型與靈活性,使用戶可以根據(jù)需要在同一儀器硬件上靈活使用常規(guī)色譜柱和RRLC色譜柱。而鍵合相品牌豐富的ZORBAX RRHT色譜柱(如SB、XDB、Extend、Eclipse Plus等),又為相同品牌、不同粒徑填料之間方法的相互轉(zhuǎn)換提供了便利條件,使RRLC與之間方法的相互轉(zhuǎn)換非常方便?;诂F(xiàn)有RRLC分離條件,也可以非常容易地獲得相應(yīng)HPLC的分離方法。只需用Method Translator將參數(shù)進(jìn)行直接轉(zhuǎn)換,即可獲得根據(jù)RRLC方法優(yōu)化參數(shù)相應(yīng)的HPLC條件參數(shù)。本研究使用相同的RRLC系統(tǒng)和HPLC色譜柱,獲得了分離選擇性與RRLC幾乎完全相同的HPLC分離結(jié)果(見圖5)。

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            圖5 西洋參分析中HPLC與RRLC分離色譜圖比較值得注意的是:與RRLC相比,HPLC在相同進(jìn)樣量時獲得的色譜峰高較低,故相對較低。同時,分離時間也大大加長,溶劑消耗亦相應(yīng)提高。

            討論與結(jié)論

            -中國藥典的藥物分析方法中并未指定色譜柱品牌。而不同品牌、相同鍵合相的色譜柱又存在不同的選擇性差異,故直接應(yīng)用藥典方法時往往需要對方法進(jìn)行調(diào)整或優(yōu)化,尤其是對于復(fù)雜樣品的分離而言。使用小顆粒短柱的RRLC分離可以顯著加快,故可以大大縮短方法開發(fā)和優(yōu)化過程所需的時間。如此獲得的RRLC分離條件,又可以簡單方便地轉(zhuǎn)換成常規(guī)HPLC方法,并在RRLC系統(tǒng)上實現(xiàn)HPLC分離。所以,使用RRLC系統(tǒng)進(jìn)行分離會大大提高工作效率。

            -RRLC分離不僅可以大幅度縮短分析時間,而且能夠降低溶劑消耗。

            -RRHT色譜柱擁有與常規(guī)HPLC內(nèi)徑相同的4.6mm色譜柱,使之可以接近或保持與HPLC相同的進(jìn)樣量。與HPLC相比,在保持相同進(jìn)樣量的前提下,使用小顆粒填料的RRLC可以顯著改善分離。

            -RRLC可以在快速分析中仍然保持出色的分離重現(xiàn)性。

            -不同色譜柱具有不同的選擇性,因而可以造成方法轉(zhuǎn)換中的分離狀況變化。選擇具有相同鍵合相品牌的不同顆粒色譜柱,會簡化HPLC與RRLC方法之間相互轉(zhuǎn)換中的參數(shù)優(yōu)化過程。ZORBAX系列RRHT色譜柱涵蓋了非常豐富的鍵合相品牌,如SB、XDB、Eclipse Plus、Extend等,方便用戶靈活選擇與HPLC相同品牌鍵合相的小顆粒填料。

            -溫度對色譜柱選擇性的調(diào)節(jié)作用不可小視。RRLC具有制冷功能的柱溫箱,不僅溫度控制范圍寬(室溫以下15~100℃),而且控溫精確高(±0.05℃),即便在室溫以下亦能精密控溫??焖佟⒕_的溫度調(diào)節(jié)與控制能力,不僅保證了分離的保留時間重現(xiàn)性,而且為用戶利用溫度進(jìn)行選擇性調(diào)節(jié)提供了極大的便利。

            色譜條件
            色譜柱:ZORBAX SB C18 4.6×150mm,5
            流動相:A為0.1%H3PO4,B為乙腈,梯度分離
            流速:1ml/min
            其它條件同圖2。(end)


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            關(guān)鍵詞: RRLC HPLC 分離速度 靈敏度

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