一、標準起草背景

　　苯在各行業(yè)被廣泛使用，制鞋和箱包工業(yè)中大量使用苯或含苯的溶劑和黏膠劑，在我國尚有此類企業(yè)存在空氣苯嚴重超標的情況。長期以來，對職業(yè)苯接觸者進行暴露評價一直采用作業(yè)場所的環(huán)境監(jiān)測。近年來，發(fā)達國家逐步采用生物監(jiān)測技術檢測苯接觸的內暴露指標苯巰基尿酸(SPMA)，并將生物監(jiān)測與環(huán)境監(jiān)測相結合，全面評價苯作業(yè)工人的個體接觸水平。我國至今尚未開展對職業(yè)接觸苯的生物限值及其檢測方法的研究，制定該標準有利于對苯作業(yè)者職業(yè)暴露水平的進行客觀評價。

　　二、標準使用范圍

　　本標準規(guī)定了尿中苯巰基尿酸濃度的檢測方法，適用于職業(yè)接觸苯工人尿中苯巰基尿酸濃度的測定。尿中苯巰基尿酸(SPMA)與苯接觸者存在良好相關性，是低濃度苯接觸特異和敏感的生物標志物。目前國外研究機構主要采用高效液相色譜法(HPLC)、液質聯(lián)用(LC-MS、LC-MS/MS)、氣相色譜法(GC)、氣質聯(lián)用(GC-MS)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等方法檢測尿中SPMA。HPLC法是各國職業(yè)衛(wèi)生機構進行生物監(jiān)測的常用方法。目前國內HPLC儀基本普及，利于其作為職業(yè)苯接觸尿中SPMA檢測方法的應用。本法所用儀器在基層單位已普及，方法前處理簡單易操作，樣品采集、運輸、保存方便，色譜操作易于掌握，因此本方法便于推廣應用。

　　三、標準制定的方法和依據(jù)

　　本方法原理是尿中苯巰基尿酸(S-phenylmercapturic acid, SPMA)經(jīng)氯仿∶異丙醇(5∶1，v/v)液-液萃取后，經(jīng)ODS柱分離，紫外檢測器檢測，以SPMA峰保留時間定性，峰高或峰面積定量。該方法選擇乙腈-0.3%甲酸(25∶75，v/v)為流動相，0.3%甲酸可使SPMA色譜峰保留時間短，而且出峰附近沒有雜質峰干擾。對SPMA全離子峰(掃描范圍：100-300 m/z)可見SPMA分子離子峰([M-H]—m/z238)和一個碎片峰(m/z109)，其中[M-H]—m/z238為基峰，將其作為定量分析檢測的離子。該方法最低檢測限為10μg/L;線性范圍為10～320μg/L。應用該方法對55名低濃度苯作業(yè)者的現(xiàn)場研究表明，個體接苯濃度的TWA范圍為0.71～32.17mg/m3，尿中SPMA濃度范圍為10～924μg/L，可滿足10ppm以下苯接觸人群生物監(jiān)測的需要，特別對我國苯作業(yè)場所職業(yè)接觸限值TWA =6mg/m3內的人群可進行有效生物監(jiān)測與評價。

　　本方法用于測定尿中SPMA不足之處是保留時間較長，檢測靈敏度較低，但仍可定量區(qū)分職業(yè)與非職業(yè)苯接觸。本方法選用氯仿∶異丙醇(5∶1，v/v)萃取，實驗表明混合溶劑萃取效率高。流動相選用乙腈作為流動相A，乙腈-甲醇-三乙胺(磷酸調節(jié)PH)為流動相B，采用梯度洗脫以縮短分析檢測時間。柱溫箱溫度設置在35℃時，尿樣中樣品峰周圍的雜質峰對SPMA出峰的影響最小，色譜峰分離較完全。方法選擇205nm波長作為檢測波長，可保證在基線平穩(wěn)的狀態(tài)下，既降低背景干擾、又提高檢測的靈敏度。尿液PH對SPMA提取效果影響大，Paci[7]將尿樣先加強酸后加堿液調節(jié)適宜pH值后用有機溶劑提取，其機制是尿中SPMA前體在酸性條件下可水解為SPMA;實驗中發(fā)現(xiàn)尿樣pH在1～2時，SPMA的提取回收率較高。

　　四、標準使用的說明

　　本方法樣品進行前處理時，需要調節(jié)尿樣使pH<2時，這時的SPMA的提取回收率較高。在實驗過程中，在流動相B中，當調節(jié)三乙胺溶液的pH=2.16時，SPMA色譜峰的分離效果較好。將柱溫箱的溫度設置在35℃時，尿樣中樣品峰周圍的雜質峰對SPMA出峰的影響最小。在低濃度苯接觸時吸煙可能存在影響，采樣前一天接觸者應避免吸煙。需要注意的是，在中、高濃度的苯接觸時，班后反-反式粘糠酸(ttMA)與空氣苯濃度的相關性優(yōu)于苯巰基尿酸(SPMA)。建議在接苯濃度5ppm以下時可首選尿SPMA為生物監(jiān)測指標，在5ppm-15ppm首選尿ttMA，在15ppm以上時兩項指標均可選擇。